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L-半乳糖苷-1.4-內(nèi)酯脫氫酶（Gal LDH）檢測試劑盒（分光光度法50T/48S）
| 貨號 | SH0553 | 售價（元） | 1500 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0553 |
L-半乳糖苷-1.4-內(nèi)酯脫氫酶（Gal LDH）檢測試劑盒（分光光度法50T/48S） |
50管/48樣 |
測定意義：
L-半乳糖途徑是合成AsA的主要途徑。Gal LDH位于線粒體內(nèi)膜，負(fù)責(zé)催化植物體內(nèi)AsA生物合成的最后一步，也是該途徑的關(guān)鍵酶之一，對植物體內(nèi)AsA含量的積累起著至關(guān)重要的作用。
測定原理：
Gal LDH催化L-半乳糖內(nèi)酯還原細(xì)胞色素c（Cyt c），還原型Cyt c在550nm有吸收峰；測定還原型Cyt c增加速率，來計算Gal LDH活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0553-50T/48S |
Storage |
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試劑一：液體 |
50ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入40ml蒸餾水，充分溶解。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入5ml蒸餾水，充分溶解。
自備儀器和用品：
臺式離心機、可見分光光度計、1ml玻璃比色皿、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。13000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
Gal LDH測定操作：
1. 分光光度計預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到550nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴鍋中預(yù)熱30 min。
3. 依次在1ml玻璃比色皿中加入100μl上清液、800μl預(yù)熱的試劑二和100μl試劑三，迅速混勻后于550nm比色，記錄10s和130s的吸光值A1和A2，△A = A2﹣A1。
Gal LDH活性計算公式：
(1). 按蛋白濃度計算
Gal LDH活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘還原1nmol Cyt c 為1個酶活單位。
Gal LDH (nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V反總×109÷（Cpr×V樣）÷T
=289×△A ÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計算
Gal LDH活性單位定義：25℃中每克樣品每分鐘還原1nmol Cyt c 為1個酶活單位。
Gal LDH (nmol/min/g鮮重) = △A÷ε÷d×V反總×109÷（W×V樣÷V樣總）÷T
=289×△A ÷W
ε：還原型Cyt c摩爾消光系數(shù)，17.3×103L/ mol/cm；d：比色皿光徑(cm)，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，1ml=0.001 L；109：1mol=1×109nmol；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μl=0.1ml；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/ml，蛋白質(zhì)濃度需要另外測定，建議使用本公司蛋白質(zhì)含量BCA試劑盒；V樣總：加入提取液體積，1ml；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，2min。
注意事項:
試劑二和試劑三配制好后3天內(nèi)使用完。