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脫氫抗壞血酸（DHA）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0552 | 售價(jià)（元） | 1020 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0552 |
脫氫抗壞血酸（DHA）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/96S） |
100T/96S |
測(cè)定意義：
AsA作為植物細(xì)胞一個(gè)重要生理指標(biāo)，其AsA 的含量、氧化還原狀態(tài)(AsA/DHA 比率)及其合成與代謝相關(guān)酶類(lèi)活性的變化涉及植物對(duì)一系列環(huán)境脅迫的響應(yīng)。DHA是AsA的可逆的氧化型，在生物體內(nèi)，與抗壞血酸共同組成氧化還原系統(tǒng)，具有電子受體的作用。
測(cè)定原理：
DTT還原DHA生成AsA，通過(guò)測(cè)定體系中AsA的生成速率，即可計(jì)算出DHA含量。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0552-100T/96S |
Storage |
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試劑一：液體 |
100ml |
室溫 |
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試劑二：液體 |
16ml |
室溫 |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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說(shuō)明書(shū) |
一份 |
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試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入5ml蒸餾水充分溶解。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1瓶， 4℃保存。臨用前加入5.743 ml蒸餾水充分溶解；吸取0.1 ml上述溶液，加入0.9 ml蒸餾水，混勻，即為100μmol/L DHA。
自備儀器和用品：
低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。
樣品中DHA提?。?/span>
組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。12000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；12000g，4℃離心10min，取上清液置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體：直接測(cè)定。
DHA測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到265 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴鍋中預(yù)熱30 min。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：依次在微量石英比色皿/96孔板加入20μl標(biāo)準(zhǔn)液、160μl預(yù)熱的試劑二和20μl試劑三，迅速混勻后于265nm比色，記錄10s和130s的吸光值A1和A2，△A空白管=A2-A1。
4. 測(cè)定管：依次在微量石英比色皿/96孔板加入20μl上清液、160μl預(yù)熱的試劑二和20μl試劑三，迅速混勻后于265nm比色，記錄10s和130s的吸光值A3和A4，△A測(cè)定管=A4-A3。
注意：標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
計(jì)算公式：
a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
(1). 按蛋白濃度計(jì)算
DHA(nmol/mg prot) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管×V標(biāo)準(zhǔn)]÷（Cpr×V樣）
=100×△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算
DHA(nmol/g 鮮重) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管×V標(biāo)準(zhǔn)]÷(W×V樣÷V樣總)
=100×△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管÷W
(3). 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
DHA(nmol/104 cell) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管×V標(biāo)準(zhǔn)]÷(W×V樣÷V樣總)
=100×△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
DHA(nmol/ml) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管×V標(biāo)準(zhǔn)]÷V樣
=100×△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管
C標(biāo)準(zhǔn)液：100μmol/L；V樣總：上清液總體積，1.0 ml=1 ×10-3 L；V標(biāo)準(zhǔn)：加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.02ml；V樣：加入樣本體積，0.02ml；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣品質(zhì)量（g）。
b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
(1). 按蛋白濃度計(jì)算
DHA(nmol/mg prot) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管×V標(biāo)準(zhǔn)]÷（Cpr×V樣）
=100×△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算
DHA(nmol/g 鮮重) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管×V標(biāo)準(zhǔn)]÷(W×V樣÷V樣總)
=100×△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管÷W
(3). 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
DHA(nmol/104 cell) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管×V標(biāo)準(zhǔn)]÷(W×V樣÷V樣總)
=100×△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
DHA(nmol/ml) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管×V標(biāo)準(zhǔn)]÷V樣
=100×△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管
C標(biāo)準(zhǔn)液：100μmol/L；V樣總：上清液總體積，1.0 ml=1×10-3 L；V標(biāo)準(zhǔn)：加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.02ml；V樣：加入樣本體積，0.02ml；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣品質(zhì)量（g）。
注意事項(xiàng)：
1. 臨用前配制的試劑未使用完的4℃保存，3天內(nèi)使用完。
2. 最低檢出限為10μmol/L。