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葡萄糖-6-磷酸（6PG）檢測(cè)試劑盒（100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0229 | 售價(jià)（元） | 1260 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0229 |
葡萄糖-6-磷酸（6PG）檢測(cè)試劑盒（100T/96S） |
100管/48樣 |
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
6PG (Glucose-6-phosphate，葡萄糖-6-磷酸，又稱6-磷酸葡萄糖)，是糖酵解和磷酸戊糖途徑的中間產(chǎn)物，廣泛存在于動(dòng)植物體和微生物中。在糖酵解的第一步反應(yīng)中，葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸，然后通過磷酸葡萄糖異構(gòu)酶的催化形成果糖-6-磷酸，以繼續(xù)糖酵解的其它步驟；而在戊糖磷酸途徑中，葡萄糖-6-磷酸是其第一個(gè)底物，該過程也是生成NADPH的主要途徑。此外，葡萄糖-6-磷酸也能轉(zhuǎn)化形成糖原或淀粉而被儲(chǔ)存起來。
測(cè)定原理：
6-磷酸葡萄糖脫氫酶可催化6PG和NADP+生成6磷酸葡萄糖酸和NADPH，NADPH在1-mPMS的作用下使WST-8顯橙黃色，在450 nm下測(cè)定吸光值。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0229-100T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
60ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
12ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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試劑三：液體 |
1.5ml |
4℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰、蒸餾水。
6PG提?。?
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）， 8000g，25℃離心10min，取上清待測(cè)。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿，8000g，25℃離心10min，取上清待測(cè)。
3、血清（漿）等液體樣品：直接測(cè)定。
測(cè)定步驟：
1、酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm。
2、試劑二的配制：臨用前加入3ml水充分溶解待用，用不完的試劑分裝后-20℃保存；
3、工作液的配制：臨用前按照樣本數(shù)量，按以下比例配制工作液
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試劑名稱（μl） |
測(cè)定工作液 |
對(duì)照工作液 |
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試劑一 |
100 |
100 |
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試劑二 |
50 |
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水 |
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50 |
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試劑三 |
10 |
10 |
樣本測(cè)定
按下表在96孔板中加入如下試劑
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試劑名稱（μl） |
測(cè)定管 |
對(duì)照管 |
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樣本 |
50 |
50 |
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測(cè)定工作液 |
150 |
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對(duì)照工作液 |
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150 |
37℃避光孵育30min，450nm下測(cè)定吸光值A測(cè)定與A對(duì)照，△A=A測(cè)定-A對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
6PG含量計(jì)算：
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 3.8589x - 0.0016，R2 = 0.997； x為6PG含量（μmol/ml），y為吸光值。
2、按照血清（漿）體積計(jì)算
6PG含量（nmol/ml）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷V1×1000
=259.1×(△A+0.0016)
3、按照蛋白濃度計(jì)算
6PG含量（nmol/mg prot）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷(V1×Cpr)×1000
=259.1×(△A+0.0016) ÷Cpr
4、按照樣品質(zhì)量計(jì)算
6PG含量（nmol/g鮮重）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷(W ×V1÷V2）×1000
=259.1×(△A+0.0016) ÷W
3、按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
6PG含量（nmol/104 cell）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷（500×V1÷V2）×1000
=0.518×(△A+0.0016)
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.05ml；V2：加入提取液體積，1 ml； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬；1000，μmol到nmol的換算系數(shù)。