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葡萄糖-6-磷酸(6PG)檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/24S)

貨號(hào) SH0228 售價(jià)(元) 696
規(guī)格 50T/24S CAS號(hào)
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貨號(hào)

名稱(chēng)

規(guī)格

SH0228

葡萄糖-6-磷酸(6PG)檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/24S)

50管/24樣

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定                                             

測(cè)定意義:

   6PG (Glucose-6-phosphate葡萄糖-6-磷酸,又稱(chēng)6-磷酸葡萄糖),是糖酵解和磷酸戊糖途徑的中間產(chǎn)物,廣泛存在于動(dòng)植物體和微生物中。在糖酵解的第一步反應(yīng)中,葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸,然后通過(guò)磷酸葡萄糖異構(gòu)酶的催化形成果糖-6-磷酸,以繼續(xù)糖酵解的其它步驟;而在戊糖磷酸途徑中,葡萄糖-6-磷酸是其第一個(gè)底物,該過(guò)程也是生成NADPH的主要途徑。此外,葡萄糖-6-磷酸也能轉(zhuǎn)化形成糖原或淀粉而被儲(chǔ)存起來(lái)。

測(cè)定原理:

6-磷酸葡萄糖脫氫酶可催化6PGNADP+生成6磷酸葡萄糖酸和NADPH,NADPH1-mPMS的作用下使WST-8顯橙黃色,在450 nm下測(cè)定吸光值。

組成:

產(chǎn)品名稱(chēng)

SH0228-50T/24S

Storage

提取液:液體

60 ml

4℃

試劑一:液體

30 ml

4℃

試劑二:粉劑

1

-20℃

試劑三:液體

3ml

4℃避光

說(shuō)明書(shū)

一份

 

自備儀器和用品:

分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。

6PG提?。?

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(ml)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次), 8000g,25℃離心10min,取上清待測(cè)。

2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1ml提取液),進(jìn)行冰浴勻漿,8000g,25℃離心10min,取上清待測(cè)。

3、血清(漿)等液體樣品:直接測(cè)定。

 

測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm,蒸餾水調(diào)零。

2、試劑二的配制:臨用前加入8ml水充分溶解待用,用不完的試劑分裝后-20℃保存;

3、工作液的配制:臨用前按照樣本數(shù)量,按以下比例配制工作液

試劑名稱(chēng)(μl

測(cè)定工作液

對(duì)照工作液

試劑一

500

500

試劑二

250

 

 

250

試劑三

50

50

樣本測(cè)定

按下表在比色皿中加入如下試劑

試劑名稱(chēng)(μl

測(cè)定管

對(duì)照管

樣本

250

250

測(cè)定工作液

750

 

對(duì)照工作液 

 

750

37℃避光孵育30min,450nm下測(cè)定吸光值A測(cè)定與A對(duì)照,△A=A測(cè)定-A對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

 

6PG含量計(jì)算:

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 7.7178x - 0.0016,R2 = 0.997x6PG含量(μmol/ml),y為吸光值。

2、按照血清(漿)體積計(jì)算

6PG含量(nmol/ml= [(△A+0.0016)÷7.7178×V1]÷×V1×1000

=129.6×(△A+0.0016)

3、按照蛋白濃度計(jì)算

6PG含量(nmol/mg prot= [(△A+0.0016)÷7.7178×V1]÷(V1×Cpr)×1000

=129.6×(△A+0.0016) ÷Cpr

4、按照樣品質(zhì)量計(jì)算

6PG含量(nmol/g鮮重)= [(△A+0.0016)÷7.7178×V1]÷(W ×V1÷V2×1000

=129.6×(△A+0.0016) ÷W

3、按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

6PG含量(nmol/104 cell= [(△A+0.0016)÷7.7178×V1]÷500×V1÷V2×1000

=0.259×(△A+0.0016)

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.25ml;V2:加入提取液體積,1 ml; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn);1000,μmolnmol的換算系數(shù)。

 

 

 

 

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