解析文章：《Conservation of an immune homeostasis module in land plants》 

作者：Ruoqi Dou ¹ , Karima El Mahboubi ² , Cailun A.S. Tanney ¹ , Jiashu Chu ^3,a , Melissa Bredow ¹ , Maria Camila Rodriguez Gallo 4 , Dominique Lauressergues ² , Jean Keller ² , Virginia Natali Miguel ¹ , Thomas A. DeFalco ^{3,b , R}. Glen Uhrig ^4,5 , Cyril Zipfel ³, Pierre-Marc Delaux ² , and Jacqueline Monaghan ^1,* 

链接：https://www.bioz.com/articles/showDocs/?q=bio_rxiv__2024__10__01__616128&uq=*&v=&k=1dS238k0216N820MIp01&ix=45ad23

 

背景

该文章探讨了植物中CPK28-PUB25/26-BIK1模块的保守性及其在植物免疫稳态中的作用。CPK28是一种钙依赖型蛋白激酶，已知在多种植物中调控免疫稳态和生长发育。文章特别关注了在陆生植物中，该模块如何进化并保守地调控植物的免疫反应。

 

方法

植物材料：

拟南芥：用于功能互补实验，检测MPCPK28在拟南芥中的功能。

地钱（Marchantia polymorpha）：作为非血管植物的模型，研究CPK28及其相关蛋白的进化和功能。

烟草（Nicotiana benthamiana）：用于蛋白亚细胞定位的瞬时表达实验。

 

基因克隆与表达：

通过分子克隆技术构建各种表达载体，包括MPCPK28、MPPBLa、MPPUB20e等基因的过表达载体。使用Golden Gate、Gateway、In-Fusion、Gibson Assembly等多种克隆方法。

 

蛋白纯化与体外激酶实验：

从大肠杆菌中纯化带有His标签或GST标签的重组蛋白。使用Tymora Analytical品牌的pIMAGO HRP Detection on Western Blot试剂盒（货号：800-40）检测激酶活性。

 

细胞降解实验与泛素化实验：

在体外进行细胞降解实验，检测MPPBLa和AtBIK1的蛋白降解情况。进行泛素化实验，验证MPPUB20e对MPPBLa的泛素化作用。

 

磷酸化蛋白组学分析：

对地钱蛋白提取物进行磷酸化蛋白组学分析，鉴定MPCPK28的磷酸化底物。

 

植物表型分析：

观察MPCPK28过表达地钱植株的表型变化，包括生长发育和免疫反应。

在拟南芥中进行互补实验，观察MPCPK28对cpk28-1突变体表型的恢复作用。

 

实验介绍 - Tymora Analytical品牌的pIMAGO HRP Detection on Western Blot试剂盒

产品作用：

Tymora Analytical品牌的pIMAGO HRP Detection on Western Blot试剂盒（货号：800-40）是一种用于Western Blot检测的高灵敏度试剂盒。它结合了酶联免疫吸附测定（ELISA）的高灵敏度和传统Western Blot的特异性，能够检测低丰度蛋白的磷酸化状态。该试剂盒特别适用于检测激酶活性实验中的磷酸化底物，能够清晰、准确地显示蛋白的磷酸化水平。

 

高灵敏度：

pIMAGO试剂盒采用先进的化学发光技术，能够在低丰度蛋白存在的情况下提供清晰的信号，使得激酶活性检测更加准确可靠。在研究低丰度或短寿命的磷酸化蛋白时，pIMAGO试剂盒能够显著提高检测灵敏度，避免假阴性结果。

 

特异性：

试剂盒中的抗体经过严格筛选和优化，能够特异性地识别目标蛋白的磷酸化位点，减少非特异性结合带来的背景干扰。结合传统Western Blot的特异性，pIMAGO试剂盒能够准确反映蛋白的磷酸化状态，为激酶活性研究提供有力支持。

 

操作简便：

试剂盒提供了完整的操作指南和配套试剂，用户只需按照指南逐步操作即可完成实验。

无需复杂的实验步骤或昂贵的仪器设备，适用于各种实验室环境。

 

广泛应用：

pIMAGO试剂盒不仅适用于激酶活性检测，还可用于其他需要高灵敏度Western Blot检测的实验场景。在信号转导、细胞周期调控、癌症研究等领域具有广泛应用前景。

 

应用：

在本文中，pIMAGO试剂盒被用于检测MPCPK28的激酶活性及其底物的磷酸化状态。通过纯化MPCPK28及其底物蛋白（如MPPBLa和MPPUB20e），在体外进行激酶反应，并使用pIMAGO试剂盒检测底物的磷酸化水平。实验结果表明，MPCPK28能够磷酸化MPPBLa和MPPUB20e等多个底物，且磷酸化位点在进化上高度保守。这些结果为揭示CPK28-PUB25/26-BIK1模块在陆生植物中的保守性和功能提供了重要证据。

 

结论

文章通过一系列实验证明了CPK28-PUB25/26-BIK1模块在陆生植物中的保守性及其在免疫稳态调控中的重要作用。主要结论包括：

MPCPK28的功能保守性：

MPCPK28在地钱中显示出与拟南芥AtCPK28相似的激酶活性和功能，能够调控地钱的免疫稳态和生长发育。

 

底物的磷酸化调控：

MPCPK28能够磷酸化多个底物蛋白，包括MPPBLa和MPPUB20e等，这些底物的磷酸化在进化上高度保守。

 

模块的保守性：

CPK28-PUB25/26-BIK1模块在陆生植物中广泛存在且功能保守，对于维持植物的免疫稳态具有重要意义。

 

进化意义：

该模块在陆生植物进化过程中可能起到了关键的调控作用，有助于植物适应不同的生态环境和微生物群落。

 

综上所述，文章通过深入研究CPK28-PUB25/26-BIK1模块的保守性和功能，为揭示植物免疫稳态的调控机制提供了新的视角和线索。Tymora Analytical品牌的pIMAGO HRP Detection on Western Blot试剂盒在实验中发挥了重要作用，为准确检测蛋白磷酸化状态提供了有力支持。

 

Tymora品牌 pIMAGO?-biotin Phosphoprotein Detection Kit

For Western Blot HRP-based detection(ECL)

货号：800-40 无需抗体的磷酸化蛋白检测试剂盒

 

pIMAGO是一种通用的磷酸化蛋白检测技术，能够对磷酸化分子进行敏感和特异性的识别。与磷酸化抗体不同，该结合不受氨基酸序列的影响，因此可用于检测任何蛋白质位点上的任何磷酸化发生。pIMAGO检测方案类似于一个简单的Western Blot，简单、便捷、高效。