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測(cè)定意義：

無機(jī)磷主要指磷酸根，參與生物體內(nèi)多種代謝，包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質(zhì)磷酸化和脫磷酸化等等，此外促進(jìn)碳水化合物的合成、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)運(yùn)。

測(cè)定原理：

鉬藍(lán)與磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物質(zhì)，通過測(cè)定660nm光吸收，即可計(jì)算無機(jī)磷含量。

組成：

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入10 ml蒸餾水，充分溶解后加入試劑二（全部），混勻。

自備儀器和用品：

離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水。

無機(jī)磷提取：

按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。10000rpm，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到660 nm，蒸餾水調(diào)零。

2.打開水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到40℃。

3. 空白管：取0.5ml EP管，依次加入100μl蒸餾水，100μl試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取0.5ml EP管，依次加入10μl標(biāo)準(zhǔn)液，90μl蒸餾水，100μl試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 測(cè)定管：取0.5ml EP管，依次加入10μl上清液，90μl蒸餾水，100μl試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

組織無機(jī)磷含量計(jì)算：

（1） 按照蛋白含量計(jì)算

無機(jī)磷含量(μmol/mg prot)= [C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V總÷Cpr

=1×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷Cpr

（2） 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

無機(jī)磷含量(μmol/g 鮮重 )= [C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V總÷W

=1×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：1mmol/L；V總：上清液總體積，1ml=0.001 L；W：樣品質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑三需臨用前配制，并且當(dāng)天使用完畢。

2. 40min內(nèi)完成比色。

3. 最低檢出限為10μmol/L。