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焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶（PFP）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0530 | 售價(jià)（元） | 2880 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0530 |
焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶（PFP）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/96S） |
100T/96S |
測(cè)定意義：
焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶（PFP，EC2.7.1.90）是一種胞質(zhì)酶，廣泛存在于植物組織中，催化果糖-6-磷酸與果糖-1,6-二磷酸之間的可逆轉(zhuǎn)化，在光合作用碳代謝中起重要作用。
測(cè)定原理：
PFP催化6-磷酸果糖轉(zhuǎn)化為1,6-二磷酸果糖，它在醛縮酶和磷酸丙糖異構(gòu)酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)?/span>3-磷酸甘油醛，再由3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH催化生成3-磷酸甘油酸、NAD和磷酸，340nm處的吸光度變化反映了PFP的活性的高低。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0530-100T/96S |
Storage |
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提取液:液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
10ml |
4℃避光 |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
-20℃避光 |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
-20℃避光 |
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試劑四：粉劑 |
1ml |
4℃避光 |
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試劑五：液體 |
1ml |
4℃避光 |
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試劑六：液體 |
2ml |
4℃避光 |
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說(shuō)明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加2ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加2ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
自備儀器和用品：
天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。
酶液提?。?/span>
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1ml提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
3. 液體：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1. 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 取微量石英比色皿/96孔板，依次加入100μl試劑一，20μl試劑二，20μl試劑三，10μl試劑四，10μl試劑五，20μl試劑六，20μl粗酶液，充分混勻，記錄340nm處10s的吸光值A1和310s的吸光值A2，△A=A1-A2
計(jì)算公式:
a. 使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按照樣本蛋白濃度計(jì)算
酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PFP（nmol/min /mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PFP（nmol/min /g 鮮重）=ΔA÷（ε×d）×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W
（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活單位定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PFP（nmol/min/104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總) ÷T
=321.54×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按照液體體積計(jì)算
酶活單位定義：每毫升液體每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PFP（nmol/min/ml）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷V樣÷T=321.54×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g
b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按照樣本蛋白濃度計(jì)算
酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PFP（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T= 643.08×ΔA÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PFP（nmol/min /g 鮮重）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T= 643.08×ΔA÷W
（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活單位定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PFP（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總) ÷T
= 643.08×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按照液體體積計(jì)算
酶活單位定義：每毫升液體每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PFP（nmol/min /ml）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷V樣÷T= 643.08×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g