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離子結(jié)合型果膠（ISP）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/48S）
| 貨號(hào) | SH0501 | 售價(jià)（元） | 1200 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0501 |
離子結(jié)合型果膠（ISP）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/48S） |
100管/48樣 |
測(cè)定意義：
果膠是構(gòu)成細(xì)胞初生壁和中膠層的主要成分，主要由原果膠、果膠酸甲酯和果膠酸組成。果膠中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等，是許多高等植物細(xì)胞壁中含量最豐富的多糖成分，其獨(dú)特的物理、化學(xué)性質(zhì)影響著植物源食品的口感和品質(zhì)。果膠間以Ca2+橋及其他離子鍵、氫鍵、糖苷鍵、酯鍵和苯環(huán)偶聯(lián)的方式交聯(lián)，通過(guò)不同的抽提方法可以提取各種形式的果膠，如水溶性果膠（WSP）、離子結(jié)合型果膠（ISP）和共價(jià)結(jié)合果膠（CSP）。
測(cè)定原理：
利用帶有螯合劑的酸溶液提取離子結(jié)合型果膠（ISP），采用咔唑比色法測(cè)定果膠含量。果膠水解成半乳糖醛酸，在硫酸溶液中與咔唑試劑進(jìn)行縮合反應(yīng)，生成物質(zhì)在530 nm處有最大吸收峰。
試劑的組成和配制：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0501-100T/48S |
Storage |
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試劑一：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑三：標(biāo)準(zhǔn)液 |
1ml |
4℃ |
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試劑四：液體 |
5ml |
4℃ |
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說(shuō)明書(shū) |
一份 |
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自備儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、80％乙醇、丙酮、濃硫酸（不允許快遞）、研缽和蒸餾水。
樣品的前處理：
1、細(xì)胞壁的提取：取約0.3g樣本，加入1ml 80％乙醇，室溫快速勻漿，95℃水浴20min，冷卻至室溫，4000g 25℃離心10min，棄上清。沉淀加入1.5ml80％乙醇和丙酮各洗一遍（渦旋振蕩2min左右，4000g 25℃離心10min，棄上清即可），沉淀即為粗細(xì)胞壁，加入1ml試劑一（去除淀粉）浸泡15小時(shí)，4000g 25℃離心10min，棄上清，將沉淀干燥，稱重得細(xì)胞壁物質(zhì)（CWM）。
2、ISP的提取：稱取烘干的CWM 3mg，加入1ml試劑二，充分勻漿(若烘干物質(zhì)質(zhì)地堅(jiān)硬，可先研碎后再加入1ml試劑二勻漿，或者用勻漿器勻漿)。8000g 4℃離心10min，取上清液待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至530nm處，蒸餾水調(diào)零；試劑三和試劑四37℃預(yù)熱10min以上。
2、 加操作表：
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試劑名稱（μl） |
空白管 |
標(biāo)準(zhǔn)管 |
對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
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待測(cè)樣本 |
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50 |
50 |
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試劑三 |
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50 |
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蒸餾水 |
50 |
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50 |
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試劑四 |
50 |
50 |
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50 |
混勻
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濃硫酸 |
400 |
400 |
400 |
400 |
混勻，95℃水浴5min后，冷卻至室溫，取200μl 至微量石英比色皿或96孔板中，530nm處讀取吸光值，空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、對(duì)照管和測(cè)定管吸光值分別記為A1、A2、A3和A4。若A大于2，需將待測(cè)樣本用蒸餾水稀釋（可稀釋10倍或20倍）?？瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只要做一管，每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
注意事項(xiàng)：
最低檢測(cè)限為50μg /g 干重
ISP含量計(jì)算：
ISP含量(mg /g 干重)= (C標(biāo)準(zhǔn)×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀釋倍數(shù)=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀釋倍數(shù)
C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.05mg/ml；V1：加入樣本體積，0.05ml；V2：加入提取液體積，1ml； W：樣本干重，g。