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丙酮酸脫羧酶（PDC）檢測試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號 | SH0467 | 售價（元） | 1800 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0467 |
丙酮酸脫羧酶（PDC）檢測試劑盒（微量法 100T/96S） |
100T/96S |
測定意義：
PDC主要存在于酵母中，是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一，催化丙酮酸脫羧生成乙醛。
測定原理：
PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛，添加乙醇脫氫酶（ADH）來進(jìn)一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH在340 nm有吸收峰，而NAD+沒有；通過測定340 nm光吸收下降速率，來計算PDC活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0467-100T/96S |
Storage |
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試劑一：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
18ml |
4℃ |
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試劑三：液體 |
2.5ml |
4℃ |
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試劑四：粉劑 |
1支 |
﹣20℃ |
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試劑五：液體 |
30μl |
﹣20℃ |
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試劑六：液體 |
2ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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混合試劑：臨用前配制，將試劑四和試劑五轉(zhuǎn)移至試劑三中充分溶解待用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺式離心機(jī)、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍
粗酶液提取：
1、細(xì)菌或細(xì)胞處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μl提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率200W，工作3s，間歇10s，工作35次），16000g 4℃離心20min，取上清，置冰上待測。
2、組織處理：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，16000g 4℃離心20min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
PDC測定操作：
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于25℃水浴中預(yù)熱30min。
3. 空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μl蒸餾水、20μl混合試劑、140μl試劑二和20μl試劑六，迅速混勻后于340nm比色，記錄15s和75s的吸光值，分別記為A1和A2。
4. 測定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μl上清液、20μl混合試劑、140μl試劑二和20μl試劑六，迅速混勻后于340nm比色，記錄15s和75s的吸光值，分別記為A3和A4。
注意：空白管只需測定一次。
PDC活性計算：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：25℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。
PDC (nmol/min/mg prot) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(Cpr×V樣) ÷T
=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：25℃中，每克組織每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。
PDC (nmol/min /g 鮮重) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(W×V樣÷V樣總) ÷T
=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計算
活性單位定義：25℃中，每104個細(xì)胞每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。
PDC (nmol/min/104cell) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總) ÷T
=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按血清（漿）體積計算
活性單位定義：25℃中，每毫升血清（漿）每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。PDC (nmol/min /ml) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷V樣÷T
=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml=2×10-4 L，V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.02ml；V樣總：提取液體積，1 ml；Cpr：蛋白濃度（mg/ml），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量試劑盒；W ：樣品質(zhì)量； T：反應(yīng)時間，1 min。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：25℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。
PDC (nmol/min/mg prot) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(Cpr×V樣) ÷T
=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：25℃中，每克組織每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。
PDC (nmol/min /g 鮮重) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(W×V樣÷V樣總) ÷T
=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計算
活性單位定義：25℃中，每104個細(xì)胞每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。
PDC (nmol/min/104cell) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總) ÷T
=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按血清（漿）體積計算
活性單位定義：25℃中，每毫升血清（漿）每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。PDC (nmol/min /ml) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷V樣÷T
=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.5 cm；V總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml=2×10-4 L，V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.02ml；V樣總：提取液體積，1 ml；Cpr：蛋白濃度（mg/ml），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量試劑盒；W ：樣品質(zhì)量； T：反應(yīng)時間，1 min。