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莽草酸脫氫酶(SD)檢測試劑盒(分光光度法 50T/48S)

貨號 SH0415 售價(元) 1140
規(guī)格 50T/48S CAS號
  • 產(chǎn)品簡介
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貨號

名稱

規(guī)格

SH0415

莽草酸脫氫酶(SD)檢測試劑盒(分光光度法 50T/48S)

50管/48樣

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定                                             

測定意義:

莽草酸途徑是存在于植物、真菌和微生物中的一條重要的代謝途徑,莽草酸脫氫酶是莽草酸合成途徑中的關(guān)鍵酶。

測定原理:

莽草酸脫氫酶催化莽草酸和NADP產(chǎn)生NADPH,檢測340nm下的吸光值增加速率來表示SD活性。

試劑組成和配制:

產(chǎn)品名稱

SH0415-50T/48S

Storage

提取液:液體

60ml

4℃

試劑一:液體

60ml

4℃

試劑二:粉劑

2

4℃

說明書

一份

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1、 血清(漿)中NADP+NADPH的提取

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(ml)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:

按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

測定步驟:

1、分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定

(1)在試劑二中加入25ml試劑一充分溶解混勻,置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴5min,現(xiàn)配現(xiàn)用。

2)取0.05ml樣本和0.95ml試劑二于1ml比色皿中,混勻,在340 nm波長下立即記錄20秒時的初始吸光度A1520秒時的吸光度A2,計算ΔA=A2-A1。

SD活性計算

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1 nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

SDnmol /min/mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘每分鐘產(chǎn)生1 nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

SDnmol /min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W ×V÷V樣總) ÷T=643×ΔA÷W

3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘每分鐘產(chǎn)生1 nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

SDnmol /min /104 cell)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(500×V÷V樣總) ÷T=1.286×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 L;εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cmd:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05 ml;V樣總:加入提取液體積,1 ml;T:反應(yīng)時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。

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