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山梨醇脫氫酶（SDH）檢測(cè)試劑盒（分光光度法50T/48S）
| 貨號(hào) | SH0174 | 售價(jià)（元） | 672 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0174 |
山梨醇脫氫酶（sorbitol dehydrogenase，SH）試劑盒（分光光度法50T/48S） |
50管/48樣 |
測(cè)定意義：
SH（EC 1.1.1.14）催化山梨醇脫氫生成果糖，是調(diào)控生物體內(nèi)山梨醇含量的關(guān)健酶之一。
測(cè)定原理：
SH催化山梨醇脫氫生成果糖，同時(shí)還原NAD+生成NADH，測(cè)定340nm吸光度增加速率可以計(jì)算SH活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0174-50T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
60ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
20ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前每瓶加入15ml蒸餾水，用不完的試劑仍4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入15ml蒸餾水，用不完的試劑仍-20℃保存。
自備儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
3、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 樣本測(cè)定
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試劑名稱(μl) |
測(cè)定管 |
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試劑一 |
400 |
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試劑二 |
300 |
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試劑三 |
300 |
混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）準(zhǔn)確水浴5min
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樣本 |
50 |
將上述試劑按順序加入1 ml玻璃比色皿中，加樣本的同時(shí)開始計(jì)時(shí)，記錄 20秒時(shí)的初始吸光度A1和2分20秒時(shí)的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
SH活性計(jì)算：
1、血清（漿）SH活力的計(jì)算
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
SH（nmol/min/ml）= [ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=1688×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中SH活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
SH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1688×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
SH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=1688×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
SH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=3.376×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.05×10-3 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。