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天冬酰胺合成酶（AS）檢測試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號 | SH0132 | 售價（元） | 1440 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0132 |
天冬酰胺合成酶（AS）檢測試劑盒（微量法 100T/96S） |
100管/96樣 |
測定意義：
天冬酰胺合成酶是廣泛存在于生物體內(nèi)的一類氨基轉(zhuǎn)移酶，催化谷氨酞胺的氨基向天冬氨酸轉(zhuǎn)移。當(dāng)植物處于氨毒時天冬酞胺的形成是一種解毒反應(yīng)。
測定原理：
AS催化L-天冬酰胺水解成L-天冬氨酸和氨，利用奈氏試劑檢測氨增加的速率，即可計算其酶活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0132-100T/96S |
Storage |
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試劑一：液體 |
60 ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
40ml |
4℃ |
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試劑三：液體 |
60 ml |
常溫 |
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試劑四：液體 |
5 ml |
常溫 |
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試劑五：液體 |
3 ml |
常溫 |
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試劑六：液體 |
3 ml |
常溫避光 |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
臺式離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽、冰和雙蒸水。
粗酶液提?。?/span>
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至420nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣品測定（在EP管中加入下列試劑）：
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試劑名稱（μl） |
測定管 |
對照管 |
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樣本 |
25 |
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蒸餾水 |
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25 |
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試劑一 |
100 |
100 |
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試劑二 |
400 |
400 |
混勻，37℃水浴1 小時
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試劑三 |
525 |
525 |
混勻，8000 g，25℃離心10 min；取上清液，在EP管或96孔板中加入下列試劑
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上清液 |
130 |
130 |
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試劑四 |
30 |
30 |
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試劑五 |
20 |
20 |
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試劑六 |
20 |
20 |
混勻，室溫靜置15min，420nm處讀取測定管和對照管吸光值，計算ΔA=A測定管-A對照管。對照管只要做一管。
注意：試劑六如出現(xiàn)沉淀，靜置后取上清使用。
酶活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.662x -0.0434；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/ml），y為吸光值A。
1、血清（漿）AS活性
單位定義：每ml血清（漿）每小時產(chǎn)生1μg 氨定義為一個酶活力單位。
AS（μg/h/ml）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反總÷V樣÷T=31.722×(ΔA+0.0434)
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中AS活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每小時產(chǎn)生1μg 氨定義為一個酶活力單位。
AS活力（μg/h/mg prot）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反總÷(V樣×Cpr)÷T =31.722×(ΔA+0.0434) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每小時產(chǎn)生1μg氨定義為一個酶活力單位。
AS活力（μg/h/g 鮮重）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷T =31.722×(ΔA +0.0434) ÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每小時產(chǎn)生1μg 氨定義為一個酶活力單位。
AS活力（μg/h/104 cell）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反總÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.0634×(ΔA+0.0434)
T：反應(yīng)時間，1h； V反總：反應(yīng)體系總體積：0.525ml；V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.025ml；V樣總：提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml； W：樣本質(zhì)量， g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬
b.用96孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.3046x -0.0097；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/ml），y為吸光值A。
1、血清（漿）AS活力的計算:
單位的定義：每ml血清（漿）每小時產(chǎn)生1μg 氨定義為一個酶活力單位。
AS活力（μg/h/ml）＝(ΔA +0.0097) ÷0.3046×V反總÷V樣÷T=68.94×(ΔA +0.0097)
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中AS活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每小時產(chǎn)生1μg 氨定義為一個酶活力單位。
AS活力（μg/h/mg prot）＝(ΔA +0.0097) ÷0.3046×V反總÷(V樣×Cpr)÷T =68.94×(ΔA +0.0097) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每小時產(chǎn)生1μg氨定義為一個酶活力單位。
AS活力（μg/h/g 鮮重）＝(ΔA +0.0097) ÷0.3046×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷T =68.94×(ΔA +0.0097）÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每小時產(chǎn)生1μg 氨定義為一個酶活力單位。
AS活力（μg/h/104 cell）＝(ΔA+0.0097) ÷0.3046×V反總÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.1379×(ΔA +0.0097)
T：反應(yīng)時間，1h； V反總：反應(yīng)體系總體積：0.525ml；V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.025ml；V樣總：提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml； W：樣本質(zhì)量， g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。