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乙醇脫氫酶（ADH）檢測試劑盒（微量法100T/96S）
| 貨號 | SH0100 | 售價（元） | 696 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0100 |
乙醇脫氫酶（ADH）檢測試劑盒（微量法100T/96S） |
100T/96S |
測定意義：
ADH是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶，催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換，在很多生理過程中起著重要作用。哺乳動物ADH主要在肝臟生成，肝臟損傷導(dǎo)致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。
測定原理：
ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+，NADH在340nm處有吸收峰，而NAD+沒有；測定340nm 吸光度下降速率，來計算ADH活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0100-100T/96S |
Storage |
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試劑一：液體 |
1瓶 |
室溫 |
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試劑二：液體 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
2瓶 |
-20℃ |
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試劑四：液體 |
1支 |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑三：粉劑×2瓶，－20℃保存，臨用前每瓶加入9ml試劑二，現(xiàn)配現(xiàn)用。
自備儀器和用品：
研缽、冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
粗酶液提取：
1、 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測。
2、 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；16000g， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測。
3、血清等液體：直接測定。
ADH測定操作：
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。
3. 在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μl樣本上清液、160μl試劑三和20μl試劑四，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化，分別記錄15s和75s時吸光值，分別記為A1和A2。△A測定管=A1-A2。
計算公式：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(Cpr×V樣)÷T
=1608×△A ÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/g 鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A ÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計算
活性單位定義：25℃中每104個細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/104cell) = (△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A ÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/ml) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T
=1608×△A
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，200μl=2×10-4 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μl=0.02 ml；V樣總：提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，1min。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T
=3215×△A÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/g 鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=3215×△A÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計算
活性單位定義：25℃中每104個細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=3215×△A÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/ml) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T
=3215×△A
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.5 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，200μl=2×10-4 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μl=0.02 ml；V樣總：提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，1min。