當(dāng)前位置： 首頁 - 產(chǎn)品目錄 - 生化試劑盒
NADP-蘋果酸脫氫酶（NADP-MDH）檢測試劑盒（分光光度50T/48S）
| 貨號 | SH0089 | 售價（元） | 420 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
|
貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
|
SH0089 |
NADP-蘋果酸脫氫酶（NADP-MDH）檢測試劑盒（分光光度50T/48S） |
50管/48樣 |
測定意義：
MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH在細(xì)胞多種生理活動中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH， NADP-MDH主要存在于真核細(xì)胞中。
測定原理：
NADP-MDH催化NADPH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導(dǎo)致340nm處光吸收下降。
組成：
|
產(chǎn)品名稱 |
SH0089-50T/48S |
Storage |
|
試劑一：提取液 |
60 ml |
4℃ |
|
試劑二：液體 |
50 ml |
4℃ |
|
試劑三：粉劑 |
2支 |
-20℃ |
|
試劑四：粉劑 |
2支 |
-20℃ |
|
說明書 |
一份 |
|
試劑三、粉劑×2支，-20℃保存；臨用前加入300μl蒸餾水；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四、粉劑×2支，-20℃保存；臨用前加入300μl蒸餾水；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
自備儀器和用品：
紫外分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 ml石英比色皿和蒸餾水。
樣本測定的準(zhǔn)備：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑二在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。
3、 操作表：
|
試劑名稱（μl） |
測定孔 |
|
樣本 |
20 |
|
試劑二 |
760 |
|
試劑三 |
10 |
|
試劑四 |
10 |
將上述試劑按順序加入1 ml石英比色皿中，混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2，計算ΔA=A1-A2。
注意：若A1-A2大于0.5，需將樣本用提取液稀釋，使A1-A2小于0.5，可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
NADP-MDH活力單位的計算：
1、血清（漿）NADP-MDH活力的計算
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/ml）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=6430×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NADP-MDH活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T =6430×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（V樣÷V樣總×500）÷T=12.86×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，8×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬。