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多酚氧化酶（PPO）檢測(cè)試劑盒（分光光度50T/24S）
| 貨號(hào) | SH0011 | 售價(jià)（元） | 576 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0011 |
多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）檢測(cè)試劑盒（分光光度50T/24S） |
50管/24樣 |
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
PPO（EC1.10.3.1）主要存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是一種含銅的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌，從而引起褐化，與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關(guān)。
測(cè)定原理：
PPO能夠催化鄰苯二酚產(chǎn)生醌，后者在525nm有特征光吸收。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0011-50T/24S |
Storage |
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提取液：液體 |
60ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
40ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
10ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）或果汁樣本的處理：
按照血清（漿）或果汁體積（ml）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議取0.1ml血清（漿）或果汁加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至525nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 樣本測(cè)定（在EP管中依次加入下列試劑）
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試劑名稱（μl） |
測(cè)定管 |
對(duì)照管 |
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樣本 |
180 |
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煮沸的樣本 |
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180 |
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試劑一 |
720 |
720 |
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試劑二 |
180 |
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蒸餾水 |
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180 |
37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃（其它物種）中準(zhǔn)確水浴10min后，95℃水浴5min充分混勻，10000g，25℃離心10min，取上清，525nm處檢測(cè)測(cè)定管和對(duì)照管吸光度。ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。
注意事項(xiàng)
煮沸樣本的操作：取300μl離心上清于EP管中，進(jìn)行5min 95℃水浴處理；每個(gè)測(cè)定管需要設(shè)一個(gè)對(duì)照管，可以在不同對(duì)照管中加入不同樣品的粗酶液，然后集中進(jìn)行5min 95℃水浴處理。
PPO活性計(jì)算：
1、血清（漿）或果汁PPO活性
單位的定義：每分鐘每ml血清（漿）或果汁在每ml反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化
0.01為一個(gè)酶活力單位。
PPO（U/ml）=ΔA×V反總÷(V液× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =60×ΔA÷V液
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞PPO活性
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位定義：每分鐘每mg組織蛋白在每ml反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.01為一個(gè)
酶活力單位。
PPO（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.01÷T =60×ΔA÷Cpr
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位定義：每分鐘每g組織在每ml反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.01為一個(gè)
酶活力單位。
PPO（U/g 鮮重）=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =60×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位定義：每分鐘每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每ml反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.01為一個(gè)酶活力單位。
PPO（U/104 cell）=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =0.12×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.08ml；V液：加入血清（漿）或果汁體積，0.1ml；V樣：加入樣本體積，0.18ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，10 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬。