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產(chǎn)品簡介

麥胚凝集素（Wheat Germ Agglutinin，WGA）是廣泛應用于細胞生物學的凝集素之一。WGA識別的糖類受體是 N-乙酰葡糖胺（GlcNAc），傾向與 N-乙酰葡糖胺的二聚體和三聚體結合。WGA 能結合含 N-乙酰葡 糖胺末端或殼二糖的寡糖，這類結構在許多血清和膜來源糖蛋白中普遍存在。細菌細胞壁肽聚糖、甲殼素（幾丁質(zhì)）、軟骨糖胺聚糖和糖脂也能結合 WGA。天然 WGA 還能通過 N-乙酰神經(jīng)氨酸（唾液酸）殘基與 一些糖蛋白相互作用。WGA 適用于胰島素受體的純化、血清蛋白和神經(jīng)示蹤。

麥胚凝集素（Wheat Germ Agglutinin，WGA）通常用來標記糖蛋白，用于活細胞或固定細胞的質(zhì)膜成像， 用于組織切片染色或其它標準的免疫分析實驗。WGA 能用作一種革蘭氏染色劑，熒光標記革蘭氏陽性菌（非革蘭氏陰性菌）。還能用于結合出芽酵母（比如釀酒酵母）的出芽痕。

本品是Alexa Fluor 488 標記的麥胚凝集素（Alexa Fluor 488 labeled Wheat Germ Agglutinin, Alexa Fluor 488- WGA），Ex/Em=495/519nm，親和純化所得，基本不含未標記的熒光素。建議工作濃度范圍是 5-20μg/ml。

產(chǎn)品性質(zhì)

1） 英文同義名：Wheat Germ Agglutinin, Alexa Fluor 488 Conjugate; Alexa Fluor 488 labeled Wheat Germ Agglutinin; Wheat germ agglutinin lectin, Alexa Fluor 488 Conjugate; Alexa Fluor 488labeled WGA Lectin;

2） 中文同義名：麥胚凝集素，Alexa Fluor 488 標記；Alexa Fluor 488 標記的麥胚凝集素；Alexa Fluor 488

標記的小麥胚芽凝集素；

3） 糖類特異性：N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）

4） 外觀：固體

5） Ex/Em：495/519nm

6） 熒光顏色：綠色

7） 應用：IF、糖生物學

質(zhì)膜標記操作流程

一、儲存液準備

于使用前，將低溫保存的 Alexa Fluor 488-WGA（1mg）置于室溫回溫至少 30min，低速離心 2-3min，往管 內(nèi)加入 500µl ddH2O（無菌）制備 2mg/ml 儲存液。短時間使用可保存在 2-8℃，長時間使用請根據(jù)單次用量分裝保存后置于-20℃保存，避免反復凍融，至少一個月穩(wěn)定。

二、標記活的真核細胞 以下是對貼壁培養(yǎng)在蓋玻片上的活細胞的通用染色步驟。用戶需根據(jù)不同的模型系統(tǒng)和預期效果來優(yōu)化染 色時間和濃度。

   2.1 制備染色工作液：用合適的生理緩沖液，比如：HBSS（無酚紅）或 HHBS，稀釋 Alexa Fluor 488-WGA（2mg/ml）儲存液到工作濃度，常用工作濃度范圍為 5-20μg/ml。 使用細胞培養(yǎng)基稀釋 WGA 偶聯(lián)物用于標記可能導致增高的非細胞染色背景。

2.2  細胞標記：加入足量的染色工作液完全覆蓋蓋玻片上的細胞。37℃孵育 10-30min。

   2.3 細胞清洗：標記結束后，吸走染色工作液，用合適的緩沖液清洗細胞 2 次。除非細胞要做固定，此時即可在預熱的 HBSS 或其它適合于成像的緩沖液中封片。

   2.4 【可選】細胞固定：可能用 4%多聚甲醛固定染色好的細胞，37℃ 15min，之后用緩沖液清洗，以及做 另一種復染。如有必要用 0.2% Triton X-100 透化細胞。

三、標記固定的真核細胞 以下是對貼壁培養(yǎng)、甲醛固定且未做透化處理細胞的通用染色步驟。用戶需根據(jù)不同的模型系統(tǒng)和預期效 果來優(yōu)化染色時間和濃度。

3.1 細胞固定：4%多聚甲醛固定細胞，37℃處理 15min。

3.2  細胞清洗：用 HBSS（不含酚紅）清洗細胞三次。不要透化細胞?。?！

   3.3 準備染色工作液：用合適的生理緩沖液，比如：HBSS（無酚紅）或 HHBS，稀釋 Alexa Fluor 488-WGA（2mg/ml）儲存液到工作濃度，常用工作濃度范圍為 5-20μg/ml。 使用細胞培養(yǎng)基稀釋 WGA 偶聯(lián)物用于標記可能導致增高的非細胞染色背景。

3.4  細胞標記：加入足量的染色工作液完全覆蓋蓋玻片上的細胞。室溫孵育 10-30min。

   3.5 細胞清洗：標記結束后，吸走染色工作液，用合適的緩沖液清洗細胞 2次。此時可能用 0.2% Triton X-100

或其它表面活性劑透化細胞，進行接下來的復染或抗體標記。

3.6 細胞成像：按照實驗需求用另一復染劑染色，之后在緩沖液內(nèi)封片或抗熒光淬滅劑來封片。

保存與運輸方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少 1 年有效。 運輸：冰袋運輸。

注意事項

1） 本品儲存液長期保存可能會產(chǎn)生沉淀，使用前請37℃溫育數(shù)分鐘，之后離心吸取上清使用。此操作基本不會對產(chǎn)生性能造成負影響。

2） 熒光染料都存在淬滅的問題，保存和操作過程中注意避光。

3） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。